Puoi anche dissalare il tuo campione mediante ultrafiltrazione a 1 decimo del volume precedente, che diluire nuovamente e ripetere il passaggio UF. Il metodo migliore per la dissalazione è la dissalazione mediante filtrazione su gel contro tampone da 50 mM, rispetto all'ultrafiltrazione (classica, non centrifuga).
Cos'è la dissalazione nella purificazione delle proteine?
La dissalazione viene utilizzata per rimuovere i sali dalle soluzioni proteiche, il fenolo o i nucleotidi non incorporati dagli acidi nucleici o l'eccesso di reticolazione o reagenti di marcatura dalle proteine coniugate.
Come si purificano le proteine?
Nella purificazione delle proteine sfuse, un primo passo comune per isolare le proteine è la precipitazione con solfato di ammonio (NH4) 2SO4. Ciò viene eseguito aggiungendo quantità crescenti di solfato di ammonio e raccogliendo le diverse frazioni di proteine precipitate. Successivamente, il solfato di ammonio può essere rimosso mediante dialisi.
Come tamponare le proteine di scambio?
Lo scambio del tampone, tuttavia, viene eseguito prima equilibrando con la resina della colonna con il tampone in cui deve finire il campione. In entrambi i casi, i costituenti del tampone che trasportano il campione la colonna sarà sostituita dalla soluzione con cui la colonna è pre-equilibrata.
Quale delle seguenti tecniche cromatografiche può essere applicata per la dissalazione delle proteine?
Come accennato in precedenza, filtrazione su gel può essere efficacemente utilizzata per le proteinedissalazione e si ottiene equilibrando prima la colonna di filtrazione del gel con acqua. Tuttavia, lo scambio del tampone si ottiene equilibrando prima la resina della colonna con il tampone target.
