2024 Autore: Elizabeth Oswald | [email protected]. Ultima modifica: 2024-01-13 00:08
I dati di densitometria generati per i Western blot sono comunemente usati per confrontare l'abbondanza di proteine tra i campioni. … Sono stati osservati dati di densitometria non lineare quando sono stati rilevati Western blot utilizzando la fluorescenza a infrarossi o la chemiluminescenza e in diverse condizioni SDS-PAGE.
Cos'è l'analisi densitometrica?
La densitometria è la misurazione quantitativa della densità ottica nei materiali fotosensibili, come la carta fotografica o la pellicola fotografica, dovuta all'esposizione alla luce.
Come usi la densitometria nell'immagine J?
Densitometria usando ImageJ
- Fai clic al centro del quadrato e trascinalo sulla corsia successiva. …
- Per l'ultima corsia, ripetere la procedura ma premere Ctrl e 3 per impostare l'ultima corsia. …
- Usa lo strumento linea per disegnare le linee per eliminare lo sfondo della corsia dai calcoli. …
- Vai a: Analizza→Gel→Etichetta i picchi per ottenere il rapporto.
Come analizzi i risultati del western blot?
Convalida i tuoi strumenti di quantificazione . Ad esempio, esegui una macchia in cui le corsie sono caricate con 20 µg, 15 µg e 10 µg di proteine totali. Dopo l'analisi, la quantificazione relativa delle bande target dovrebbe essere 2, 1,5 e 1. Prova diversi strumenti e impostazioni di quantificazione finché non riesci a riprodurre in modo affidabile i risultati corretti.
Come si quantifica una macchia occidentale?
Fase 1: Determina lo sfondo sottrattodensità della tua proteina di interesse (PI) e il controllo normalizzante (NC). Passaggio 2: identificare l'NC con il valore di densità più alto. Passaggio 3: dividere tutti i valori NC per il valore di densità NC più alto per ottenere un valore NC relativo.
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Cos'è un controllo del caricamento in western blot?
Caricamento degli anticorpi di controllo sono controlli importanti in quanto indicano lo stesso carico di campioni in tutti i pozzetti. I controlli di caricamento indicano anche il corretto trasferimento delle proteine alla membrana durante il processo di western blotting.
Perché il western blot è semi quantitativo?
È molto importante essere consapevoli del fatto che i dati prodotti con un western blot sono generalmente considerati semiquantitativi. Questo perché fornisce un confronto relativo dei livelli di proteine, ma non una misura assoluta della quantità.
