La tripsinizzazione è il processo di dissociazione cellulare mediante tripsina, un enzima proteolitico che scompone le proteine, per dissociare le cellule aderenti dal vaso in cui vengono coltivate. Quando viene aggiunta a una coltura cellulare, la tripsina scompone le proteine che consentono alle cellule di aderire al vaso.
Perché tripsinizziamo le cellule?
La tripsinizzazione viene spesso eseguita per permettere il passaggio delle cellule in un nuovo contenitore, l'osservazione per la sperimentazione o la riduzione del grado di confluenza nel pallone rimuovendo una percentuale di le celle.
Come funziona la tripsina per staccare le cellule?
Trypsin/EDTA è un metodo combinato per staccare le cellule. La tripsina taglia le proteine di adesione nelle interazioni cellula-cellula e cellula-matrice tagliando l'amminoacido delle proteine di adesione specificamente a lisina o aginina sul C-terminale se l'amminoacido a monte non è prolina.
Come si ottengono cellule aderenti tripsinizzate?
Procedura
- Rimuovere il terreno dal recipiente di coltura mediante aspirazione e lavare il monostrato con una soluzione salina priva di Ca2+ e Mg 2+ per rimuovere tutte le tracce di siero. …
- Distribuire una quantità sufficiente di tripsina o soluzione di tripsina/EDTA nei recipienti di coltura per coprire completamente il monostrato di cellule e porre in un'incubatrice a 37 °C per circa 2 minuti.
Come faccio a disabilitare la tripsina nella coltura cellulare?
Una volta che le celle appaiono staccate, aggiungi 2 volumidi mezzo di crescita completo preriscaldato per inattivaretripsina. Disperdere delicatamente il mezzo pipettando più volte la superficie dello strato cellulare per garantire il recupero del >95% delle cellule. Per colture prive di siero, inibitore della tripsina di soia (prodotto n.
