Come si inattiva la tripsina?

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Come si inattiva la tripsina?
Come si inattiva la tripsina?
Anonim

Una volta che le cellule appaiono staccate, aggiungere 2 volumi di mezzo di crescita completo preriscaldato per inattivare la tripsina. Disperdere delicatamente il mezzo pipettando più volte la superficie dello strato cellulare per garantire il recupero del >95% delle cellule.

Come faccio a interrompere l'attività della tripsina?

La digestione della tripsina può essere interrotta congelamento o abbassando il pH della reazione al di sotto di pH 4 aggiungendo acido formico, acetico o trifluoroacetico (la tripsina riacquisterà attività quando il Il pH è aumentato al di sopra del pH 4). I campioni digeriti possono essere conservati a -20°C.

Cosa neutralizza la tripsina?

Un tampone contenente ioni calcio e magnesio rallenterà anche l'attività della tripsina. FBS è tuttavia il modo più efficace per inibire l'attività della tripsina.

Il siero inattiva la tripsina?

Il siero inattiva la tripsina residua dalla digestione enzimatica dei reni e gli enzimi proteolitici successivamente sintetizzati dalle cellule. Le cellule appena tripsinizzate potrebbero essere coltivate in monostrati in assenza di siero a condizione che siano state lavate ripetutamente per rimuovere la tripsina residua.

Quanto media ci vuole per disattivare la tripsina?

Finché stai usando almeno un rapporto 1:1 del 5-10% di siero con la tua tripsina dovrebbe esserci un'inibizione più che sufficiente, seguita da centrifugazione e scambio medio con mezzo fresco.

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