Una volta che le cellule appaiono staccate, aggiungere 2 volumi di mezzo di crescita completo preriscaldato per inattivare la tripsina. Disperdere delicatamente il mezzo pipettando più volte la superficie dello strato cellulare per garantire il recupero del >95% delle cellule.
Come faccio a interrompere l'attività della tripsina?
La digestione della tripsina può essere interrotta congelamento o abbassando il pH della reazione al di sotto di pH 4 aggiungendo acido formico, acetico o trifluoroacetico (la tripsina riacquisterà attività quando il Il pH è aumentato al di sopra del pH 4). I campioni digeriti possono essere conservati a -20°C.
Cosa neutralizza la tripsina?
Un tampone contenente ioni calcio e magnesio rallenterà anche l'attività della tripsina. FBS è tuttavia il modo più efficace per inibire l'attività della tripsina.
Il siero inattiva la tripsina?
Il siero inattiva la tripsina residua dalla digestione enzimatica dei reni e gli enzimi proteolitici successivamente sintetizzati dalle cellule. Le cellule appena tripsinizzate potrebbero essere coltivate in monostrati in assenza di siero a condizione che siano state lavate ripetutamente per rimuovere la tripsina residua.
Quanto media ci vuole per disattivare la tripsina?
Finché stai usando almeno un rapporto 1:1 del 5-10% di siero con la tua tripsina dovrebbe esserci un'inibizione più che sufficiente, seguita da centrifugazione e scambio medio con mezzo fresco.