Gli artefatti del primer dimero si verificano tipicamente a un numero di cicli di soglia elevato (solitamente > 35 cicli), che è superiore al numero di cicli di soglia per l'amplicone desiderato. I dimeri del primer aumentano notevolmente quando si aggiunge DNA genomico eterologo.
Dove vedresti i dimeri di primer su un gel di DNA?
Nell'endpoint PCR non quantitativo, il dimero del primer apparirà come uno striscio più o meno debole su un gel di agarosio, sotto la banda del prodotto di interesse.
Come si formano i dimeri dei primer?
I dimeri di primer si formano quando due primer si legano l'uno all' altro, invece che al DNA stampo, a causa di regioni di complementarità del primer.
Come rilevi i dimeri dei primer?
Il modo più semplice per verificare la presenza di primer-dimeri è confrontare le tue reazioni con il tuo controllo negativo (acqua invece di DNA o RNA). I dimeri del primer si formeranno ancora nel controllo negativo. È più probabile che alcuni set di primer formino dimeri rispetto ad altri.
Perché compaiono i primer dimers?
Si vedono principalmente dimeri di primer a causa dell'elevata concentrazione del primer nella miscela di reazione della PCR. Oppure se non c'è amplificazione PCR e puoi vedere il dimero del primer nel gel di agarosio. Se sei in grado di vedere il prodotto della PCR, puoi ridurre la concentrazione del primo e mantenere le altre condizioni uguali.
