Tuttavia, quando gli spettri di emissione si sovrappongono, può essere rilevata la fluorescenza da più di un fluorocromo. Per correggere questa sovrapposizione spettrale, viene utilizzato un processo di compensazione della fluorescenza. Ciò garantisce che la fluorescenza rilevata in un particolare rivelatore derivi dal fluorocromo che viene misurato.
Perché abbiamo bisogno di una compensazione nella citometria a flusso?
È richiesta una compensazione per un esperimento di citometria a flusso a causa della fisica della fluorescenza. Un fluorocromo viene eccitato ed emette un fotone in un intervallo di lunghezze d'onda. Alcuni di questi fotoni si riversano in un secondo rivelatore, facendo apparire i singoli campioni colorati doppiamente positivi.
Qual è lo scopo principale dell'utilizzo di una cella di compensazione?
Lo scopo principale è per consentire la misurazione della vera fluorescenza nel canale primario contaminato dallo spillover dai fluorofori vicini. Pertanto, la compensazione corregge la "trasgressione" della fluorescenza tra i fluorofori. Tuttavia, non è perfetto e non può risolvere tutti gli effetti indesiderati.
Cos'è la matrice di compensazione?
Una matrice di compensazione viene calcolata utilizzando file di controllo fluorescenti a un colore raccolti su ImageStream o FlowSight con tutti i canali raccolti e in assenza di illuminazione in campo chiaro o SSC.
Cos'è la compensazione spettrale?
Uso spettralecompensazione significa che il segnale proveniente da rivelatori non primari viene ancora utilizzato per migliorare il vero segnale dei marker, ove possibile. I campioni di controllo primari vengono utilizzati per la denominazione dei parametri. … I campioni utilizzati per i rivelatori primari aiutano anche a nominare quei parametri dopo la compensazione spettrale.
